CRISPR-Cas9基因编辑技术服务

CRISPR-Cas9基因编辑技术就是通过人工设计的 sgRNA（guide RNA）来识别目的基因组序列，并引导 Cas9 蛋白酶进行有效切割 DNA 双链，形成双链断裂，损伤后修复会造成基因敲除或敲入等，最终达到对基因组DNA 进行修饰的目的。公司自主研发出基于农杆菌转化的CRISPR/Cas9丝状真菌基因编辑技术和基于原生质体瞬时表达的CRISPR/Cas9丝状真菌基因编辑技术

1、基于农杆菌转化的CRISPR/Cas9丝状真菌基因编辑技术

MaCas9表达盒通过供体载体重组到稻瘟病菌双元表达载体

2、基于原生质体瞬时表达的CRISPR/Cas9丝状真菌基因编辑技术

对稻瘟病菌糖转运蛋白基因Mohxt2和Mohxt3进行了基因编辑，并对突变体菌株产生黑色素的影响。结果表明，两个基因的敲除菌影响了菌株产生黑色素的能力。说明CRISPR/Cas9体系在编辑丝状真菌方面具有高效简单的优点。

CRISPR/Cas9介导的稻瘟病糖转运蛋白敲除模式及突变体鉴定

注：（A）为同源重组法基因编辑模式图；敲除基因结构和HPT插入位点及引物位置和方向；（B）ΔMohxt2突变体DNA扩增鉴定；M为DL5000 DNA Maker。

突变体菌株在单一碳源上的生长情况

注：（A）突变体ΔMohxt2、ΔMohxt3在不同单糖培养基上产生黑色素的能力；（B）突变体ΔMohxt2、ΔMohxt3在含葡萄糖液体培养基中的生长状态；