细菌基因敲除服务

原理：利用细菌体内广泛存在RecBCD系统对外源进入的DNA进行同源重组，从而实现目标基因的等位替换。将目标基因的同源融合片段克隆至自杀载体中，自杀载体通过接合输入到靶细菌，由于自杀载体不能在绝大部分细菌中复制，在抗生素选择压力下，只有细菌基因组靶位点整合有自杀载体的插入突变株才可以存活。在第二轮反向选择压力下，只有细菌基因组发生第二次同源重组并丢失自杀质粒的细菌才可以存活，在第二组同源重组后，子代细菌产生靶基因的缺失突变株和野生型菌株，通过PCR对平板上的克隆筛选，再经过测序验证，即可获得目的基因的缺失突变。

细菌基因敲除范围：非看家基因，革兰氏阴性细菌，少部分革兰氏阳性菌

服务价格及周期：根据菌种及敲除基因具体情况评估价格，量大优惠；实验周期6个周左右，具体以合同为准。

送样要求：菌株；提供培养条件；待突变基因序列（见范例）

本公司技术优势：

（1）     独特的供体菌，可以不要求靶细菌具有抗生素抗性。

（2）     高效的供体菌接合系统，保证自杀质粒具有高的接合转移效率。

（3）     自杀载体为T线性化载体，可直接与纯化PCR产物连接，不需要考虑酶切位点，大大节省客户时间。

（4）     优化的自杀载体序列，最大化减少冗余区，从而提高接合转移效率，减少非特异重组的概率。

（5）     自杀载体具有自主开发的反向筛选基因vmt，用于替换常规的sacB基因，从而大大增加基于自杀载体基因敲除技术的适用范围，大大减少第二次重组后缺失突变克隆的筛选工作。